CTAB法提取DNA的原理
CTAB法提取DNA的主要原理包括:
- CTAB的作用:CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)是一种阳离子去污剂,可以溶解细胞膜并形成与核酸的复合物。在高盐浓度下,CTAB与蛋白质和多糖形成复合物,但不能沉淀核酸。通过有机溶剂抽提,可以去除蛋白、多糖、酚类等杂质,最后加入乙醇沉淀DNA
。
- 其他成分的作用:
- Tris-HCl:提供缓冲环境,防止核酸被破坏。
- EDTA:抑制DNase活性。
- NaCl:提供高盐环境,使DNA充分溶解。
- β-巯基乙醇:抗氧化剂,去除酚、糖,能与酚形成络合物,也可与糖结合
。
CTAB提取缓冲液的改进配方
为了提高DNA提取的效率和纯度,提取缓冲液中可以加入一些额外的成分,例如:
- DTT(二硫苏糖醇):抑制酚类物质氧化而使得DNA发生褐变。
- PVP(聚乙烯吡咯烷酮):抑制酚类物质氧化,络合多酚和萜类物质,防止多酚类褐变而氧化,去除多糖和色素
。
CTAB提取缓冲液中添加PVP的作用
PVP在CTAB提取缓冲液中的作用主要包括:
- 络合作用:PVP可以与多酚和萜类物质形成不溶的络合物,有效去除这些次生代谢物质,从而减少对DNA提取的干扰。
- 抗氧化作用:PVP可以抑制酚类物质的氧化,防止DNA发生褐变。
- 去除多糖:PVP能有效去除多糖,因为多糖和PVP之间存在较强的亲和力,可以形成不溶的复合物,从而被去除
。
如何去除DNA中的多糖
去除DNA中的多糖可以通过以下方法:
- 使用高浓度的盐:在氯仿-异戊醇(24∶1)抽提后的水相中加入高浓度的盐(如5 mol/L NaCl),可以去除多糖,因为多糖在高盐条件下会沉淀,而DNA则保持溶解状态
。
- 使用PVP:在提取缓冲液中加入PVP,PVP可以与多糖形成不溶的复合物,从而被去除
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